ПЦР для диагностики туберкулеза

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — современный диагностический способ исследования инфекционных заболеваний методами генной инженерии. Она разработана американским биохимиком Кэри Бэнкс Муллис в 1983 году. При туберкулезе анализ ПЦР дает ответ о наличии возбудителя в крови пациента за несколько часов, имея малое количество материала.

Схема ПЦР

Суть метода

Основа метода заключается в том, что во время анализа, используя полимеразную цепную реакцию, из биологического материала больного выделяют частицы ДНК возбудителя, классифицируя его затем по виду микроорганизмов.

Биологическим материалом могут быть:

  •  кровь,
  •  экскременты в виде мочи, кала,
  •  мокрота,
  •  ликвор и другое.

Также возможно оценить стадию заболевания, определить восприимчивость возбудителя к тому или иному медицинскому препарату и назначить эффективное лечение.

Альтернатива Манту

В Российской Федерации при массовой проверки детских коллективов на микобактерии туберкулеза делают пробы Манту. К сожалению, она имеет ряд недостатков:

  •  может дать положительную реакцию не только у больных, но и привитых детей,
  •  спровоцировать приступ аллергической реакции.

Рекомендуем прочитать статью про пробу манту.

Поэтому встала необходимость проводить другие анализы на туберкулез, особенно детям, вместо Манту. Сейчас, с 2009 года, диагностика туберкулеза у детей и взрослых насчитывает несколько современных способов, один из них — тест ПЦР.

Проба Манту

Достоинства

ПЦР диагностика туберкулеза имеет ряд достоинств:

  •  Биологическая проба определяет от десяти до ста клеток, достоверность сто процентная,
  •  Исследование длится не более пяти часов,
  •  Возможность выявления туберкулеза легких, в то время, как другие методы не всегда эффективны,
  •  Возможность выявления фрагмента, соответствующего конкретному возбудителю.

Назначение

Направление на этот анализ могут дать следующие врачи: пульмонологи, фтизиатры, терапевты, у детей — педиатры. Показания к диагностике:

  •  присутствует основная симптоматика туберкулеза,
  •  длительно протекающее заболевание дыхательных путей,
  •  присутствует контакт с туберкулезными больными,
  •  при возникновении сомнения у врача после снимка рентгена.

Подготовка

За три дня до того, как сделать ПЦР анализ, для достоверности полученных данных пациент не должен курить, употреблять алкоголь и лекарственные средства. Если материалом для пробы является мокрота, не рекомендуется чистить зубы, особенно зубными пастами, которые содержат бактерицидные вещества.

Разрешается полоскание рта чистой водой. За день до процедуры необходимо исключить из рациона жирные продукты, а также продукты, вызывающие аллергию.

Забор материала осуществляется утром натощак, спустя четыре-пять часов после последнего приема пищи.

Этапы проведения

ПЦР на туберкулез основан на методе термоциклирования и включает в себя следующие этапы:

  1.  Забор биологического материала: крови, мокроты, промывной жидкости бронхов и т.п.
  2.  Для разрушения первоначальных цепочек ДНК микобактерии, материал для анализа держат под воздействием высокой температуры на протяжении нескольких минут (денатурация).
  3.  Снижение температуры для того, чтобы праймеры ДНК соединились с отсоединенной в процессе денатурации цепи ДНК (отжиг).
  4.  Копирование целевых участков ДНК (элонгация).

Чтобы получить необходимое количество копий ДНК микобактерии, осуществляется двадцать пять- тридцать циклов.

Результаты ПЦР диагностики

Ошибки в результатах

Ложный результат может быть в том случае, если в период забора материала пациент принимал медикаменты, а также, если тест проводился у лиц, прошедших противотуберкулезное терапевтическое лечение.

Ошибки возможны вследствие:

  • Приема таких препаратов, как Гепарин, и других медикаментов локального действия, способных ингибировать полимеразную реакцию, делая её бессмысленной.
  • Приема антибиотиков, так как они снижают число бактерий, и обнаружить правильное количество ДНК микроорганизмов становится невозможно.
  • Неправильного хранения материала, когда емкость с собранной биологической жидкостью была не закрыта, и в нее из внешней среды попали чужеродные микроорганизмы.

Недостатки

На современном этапе в России этим диагнозом пользуются редко в силу ряда причин:

  •  Высокая стоимость анализа, нет в наличии во многих поликлиниках,
  •  При лечении метод может дать ошибочную информацию,
  •  Не всегда возможно применение у пациентов с сильным легочным поражением, страдающих иммунодефицитом, а также при внелегочном поражении.

Поэтому, при подозрении на туберкулез более информативно будет провести комплексное обследование, включающее: диаскинтест, анализ крови на туберкулез, проба Манту, компьютерную томографию и другие методы.

Стоимость

Тест ПЦР является достаточно дорогостоящим, что делает его недоступным для большинства людей. Однако при диагностике туберкулеза важность и эффективность данного метода превышает его затраты, поскольку раннее выявление данного заболевания будет способствовать благоприятному исходу, а также предупреждению развития осложнений. Цена на анализ сильно разнится. Стоимость находится в диапазоне от 350 до 2000 рублей.